Onları SOYUQ tutun! Hüceyrələrin soyuq qalması ehtiyacı səbəbindən səlahiyyətli hüceyrələrin yaradılması prosesi çətin olur. Bu çox vacibdir, çünki hüceyrələr səriştəli hala gətirilərkən çox həssas və kövrəkdir Temperaturu aşağı saxlamaq emal zamanı hüceyrə ölümünün qarşısını almağa kömək edir.
Niyə çevrilmə təcrübəsi zamanı reaksiyalar buz üzərində saxlanılır?
Plazmid-hüceyrə qarışığı daha sonra qısa müddətə 45-50°C-yə qədər qızdırılır və DNT pozulmuş membran vasitəsilə hüceyrəyə daxil olur. Daha sonra qızdırılan qarışıq bakteriyaların daxilindəki plazmidləri saxlamaq üçün yenidən buz üzərinə qoyulur … Plazmid DNT məhlulunda çoxlu duz varsa, qövs meydana gələ bilər və bu transformasiyanı poza bilər.
Boruları niyə buzun üstünə qoyursan?
Sizcə, niyə boruları buzun üstünə qoymuşuq? DNT-ni bakteriyalara daxil etmək üçün kimyəvi kalsium xlorid (CaCl2) ilə onların içərisində deşiklər açmalıyıq. … İçindəki DNT-yə imkan vermək üçün açılan dəliklər bakteriyaları sızdırır. Onları buz üzərində saxlamasaq, onlar "qanaxaraq" öləcəklər.
Buzlu kalsium xloridin səlahiyyətli hüceyrələrin hazırlanmasında rolu nədir?
Kalsium xlorid istilik-şok transformasiyası prosesi bakteriya hüceyrələrini ətraf mühitdən DNT almağa təşviq edir. … Buz kimi soyuq CaCl2 məhlulu DNT-nin hüceyrənin səthinə bağlanmasını asanlaşdırır, daha sonra qısa müddət istilik şokundan sonra hüceyrəyə daxil olur (3).
Səlahiyyətli hüceyrələri necə saxlayırsınız?
Kütləvi hüceyrələr - 80°C-də saxlanmalıdır. -20°C-də saxlama transformasiya səmərəliliyinin (TE) əhəmiyyətli dərəcədə azalması ilə nəticələnəcək. NEB 5-alfa Competent E. coli (NEB C2987H) üzərində sınaqdan keçirildikdə hüceyrələr -20°C-də cəmi 24 saat saxladıqdan sonra 94,5% TE itirdi.
