Piqmentləri çıxarmaq üçün xloroplastlar izolyasiya tamponunda asılır. Xloroplastlardan piqmentləri çıxara bilmək üçün əvvəlcə tampondan xilas olmalıyıq. Xloroplastları tampondan ayırmağın ən yaxşı yolu hansıdır? ayırmaq üçün sentrifuqdan istifadə edin
Xloroplastı necə təcrid etmək olar?
Xloroplast izolyasiya metodunda hüceyrə divarı bir qarışdırıcı və ya homojenizator istifadə edərək mexaniki şəkildə qırılır. Sonra qırılmamış yarpaq toxuması və hüceyrə zibilləri filtrasiya yolu ilə çıxarılır. Xloroplastlar perkol qradiyenti istifadə edərək sentrifuqa yolu ilə toplanır.
Xloroplast izolyasiya tamponunu necə hazırlayırsınız?
2X bufer ehtiyatını 1:1 nisbətində dH2O suyu ilə seyreltməklə lazımi miqdarda 1X Xloroplast İzolyasiya tamponunu hazırlayın 1X Chloroplastın hər mlinə 10 µL 10% BSA məhlulu əlavə edin İzolyasiya tamponu. İstifadədən dərhal əvvəl 1 mL Xloroplast İzolyasiya Tamponuna 1 µL DTT əlavə edin. Bu buferi "Tam Bufer" olaraq etiketləyin.
Xloroplast izolyasiya tamponunda nə var?
DNT təcrid tamponu 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA və 1 mM DTT -dən ibarət idi. 8 ml DNT izolyasiya tamponu, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanol və 30 µl Proteinaz K (10 mq/ml) ilə xloroplast qranulunu 4 saat ərzində 55°C-də sentrifuqa borusuna qoyun.
Xloroplast təcrid protokolunda ispanaq yarpağının homogenləşdirilməsi üçün istifadə edilən tamponun pH-ı nədir?
İspanaq yaxşı xloroplastlarla doludur və asanlıqla təcrid olunur. Yarpaqları partlamamaq üçün 0,1 M fosfat tamponu, pH 7,5 və 0,5 M saxaroza ilə soyuq qarışdırıcıya qoymalısınız.
